猪流行性腹泻病毒分离鉴定及免疫试验

      猪流行性腹泻（PED）是由猪流行性腹泻病毒引起的猪的一种高度接触性肠道传染病，于1977年在比利时首次被发现，1982年被命名为猪流行性腹泻，我国于 1980年首次分离得到PEDV。近年来，山东、河南、湖北等省多个地区陆续发生，渐呈流行之势，仔猪死亡率最高，可达100%，给养猪业造成非常严重的经济损失。本文就近期流行性腹泻的流行情况开展调查，对病毒进行分离鉴定后对市场上不同类的疫苗免疫效果进行研究，确立了PED的综合防控技术，为养猪户提供参考，以推动养殖业的快速发展。
　　一、流行病学
　　猪流行性腹泻可单一发生或与猪传染性胃肠炎混合感染。猪流行性腹泻病毒为类冠状病毒，该病毒在65℃条件下10分钟左右就可杀死；在阳光下6～8小时可灭活；在阴暗环境中7～10天具有感染力；用0.5%苯酚在37℃下处理30分钟可杀死。康复猪可排毒2个月以上，甚至长达109天。
　　该病多发于冬季，山东省2010年冬季就曾发生，自2013年9月至2014年1月情况越发严重，表现为传播速度快，很快波及到所有猪群，已经严重影响养猪业的健康发展。
　　目前，市售疫苗种类繁多，有联合疫苗，有基因缺失苗，但疫苗质量良莠不齐，再加上抗生素的滥用，治疗方案五花八门，乱用疫苗的现象非常普遍，导致毒株变异、毒力增强，给养猪业带来重大损失。因此，研究一套合理有效的疫苗免疫方案，制定效果确实的疾病治疗方案具有重要意义。
　　二、临床症状与病理变化
　　人工感染的潜伏期，新生仔猪为15～30小时，育肥猪为2天，自然感染可能稍长些。该病的主要临床症状为水样腹泻，或者伴随呕吐。猪流行性腹泻病常以暴发性腹泻的形式发生在非免疫断奶仔猪（I型）或各种年龄的猪（Ⅱ型）。患猪表现出呕吐、腹泻和脱水，与猪传染性胃肠炎相似，但程度较轻、传播稍慢；粪稀如水，呈灰黄色或灰色；呕吐多发生于吃食或吮乳后。少数患猪体温升高1～2℃，精神沉郁，食欲减退或不食，尤其是繁殖种猪。症状的轻重随年龄的大小而有差异，年龄越小，症状越重，1周内新生仔猪常于腹泻后2～4天内脱水而死，病死率70%～100%。断奶猪、育肥猪以及母猪常呈现沉郁和厌食症状，持续腹泻4～7天，逐渐恢复正常。成年猪仅表现沉郁、厌食、呕吐等症状，如果没有继发感染且护理得当，猪很少发生死亡。
　　剖检可见主要病变为小肠膨胀，充满淡黄色液体，肠壁变薄，个别小肠黏膜有出血点，肠系膜淋巴结水肿，小肠绒毛变短，重症者绒毛萎缩，甚至消失。胃经常是空的，或充满胆汁样黄色液体。其他实质性器官无明显病变。
　　三、病毒分离鉴定
　　从2013年9月开始，沂水、莒县地区曾有2个养殖场（猪群总构成为母猪1227头，种公猪40头，育肥猪6833头，保育猪和仔猪3817头）发生过仔猪腹泻。随机采集临床有腹泻症状的哺乳仔猪采取小肠内容物，（m.mfservicos.com）共10份，送到山东农业大学实验室检测，证实该病原为猪流行性腹泻病毒。
　　四、疫苗免疫试验
　　1. 试验材料
　　①试验猪
　　本试验于2013年10～12月在沂水锦程畜牧科技发展有限公司环保猪场进行。随机选取同期妊娠健康母猪20头，随机分为A、B、C、D、E共5组，每组5头，相互分栏隔离饲养管理。
　　②试验用疫苗
　　本试验所用的两种疫苗均从市场购买，分别为TB腹泻特制二联灭活苗、青岛易邦PEDV基因缺失苗。
　　③病毒来源
　　本试验攻毒所用的病毒液来自本场经过病毒分离鉴定的毒株——7日龄仔猪肠道及内容物，RT-PCR检测为PEDV阳性，加入青霉素、链霉素研磨，使其终浓度为1000IU/毫升，加入到30%甘油生理盐水中，-20℃保存备用。
　　2. 试验方法
　　①试验前准备
　　试验开始前给母猪标耳号、仔猪称重，观察猪只采食量、粪便和精神状况等，做好相关记录。采用RT-PCR方法对猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、猪流行性腹泻、猪传染性胃肠炎和猪轮状病毒基因进行检测，确定为阴性。
　　②疫苗接种。对4组共20头试验猪按说明后海穴注射疫苗，对照组5头不进行疫苗免疫。A组于产前70天注射TB腹泻特制二联灭活苗，产前40天加强1次；B组于产前60天接种PEDV基因缺失苗，产前40天加强免疫1次；C组于产前70天注射TB腹泻特制二联灭活苗，产前40天加强1次，产前60天接种PEDV基因缺失苗，产前40天加强1次；D组在产前40天，实行反饲试验，直接饲喂经抗生素处理的PEDV阳性仔猪肠道及内容物5毫升/天，连续饲喂3天；E组为空白组。
　　③攻毒
　　剂量为5毫升/头，方法为口服。攻毒后观察记录母猪、仔猪的采食量、精神状态、排便、发病和死亡等情况。
　　3. 结果
　　攻毒后，猪只的基本情况见表1。妊娠母猪出现不同程度的腹泻，粪便呈水样、恶臭，治疗后1～2天康复，无死亡。哺乳仔猪死亡率较高，仔猪最早出生后2小时出现腹泻症状，腹水和运动僵硬见于接毒后20～30小时，最晚见于90小时。腹泻开始时排黄色黏稠便，以后变成水样便，混杂有黄白色的凝乳块，腹泻最严重时粪便几乎全部为水。呕吐、腹泻的同时患猪伴有精神沉郁、脱水、眼窝下陷、厌食、消瘦和衰竭。症状的轻重与年龄大小有关，年龄越小，症状越重。剖检可见小肠肠壁变薄，呈透明状，肠系膜淋巴结水肿、出血，肾脏有出血点。
　　所选两类疫苗均为目前市场上所售的中高端产品，通过试验结果可以看出，此次流行性腹泻病毒致病性较强，对照组死亡率最高，7日龄内死亡率为74%，总死亡率达85.1%；基因缺失苗的免疫效果优于TB二联苗免疫效果，而两者联合后免疫效果最好，7日龄以后死亡率仅有3.7%。采用反饲效果比疫苗单用效果稍微好一点，总死亡率达到35.7%。
　　五、结论
　　通过以上试验，可知产前70天注射TB腹泻特制二联灭活苗，产前40天加强1次，产前60天免疫PEDV基因缺失苗，产前40天加强1次的免疫方案对猪群能够产生有效的免疫保护。
　　对中大猪、成年母猪发生该病时，要采用停食或大幅度限食，停食时间可持续2～3天。在停食期间为了防止患猪脱水，可在食槽内添加一些补液盐，有助于降低死亡率。2～3天后患猪开始逐渐恢复采食，投喂的饲料量要逐步增加，一般经过3～7天康复。
　　该病是由冠状病毒引起的，目前尚无有效的治疗药物，但可以使用一些药物来减轻腹泻的症状，如口服杨树花口服液或硅铝酸盐配合乙酰甲喹（痢菌净）粉进行治疗。对个别腹泻严重的患猪可肌内注射猪干扰素、白细胞介素或鸡新城疫I系苗，配合博落回注射液或阿托品注射液等药物，可有效控制腹泻并降低死亡率。由于腹泻易造成猪脱水死亡，为了降低仔猪的死亡率，可对患猪及时补充电解质和水分（可通过直接饮水、腹腔注射或静脉注射等方式）。
　　此外，仔猪对温度的反应非常敏感，冷热刺激引起仔猪腹泻，特别是低温寒冷或高温潮湿，猪舍的保温效果不好或湿度过高都会引发猪流行性腹泻。所以，我们要综合考虑才能彻底做好猪流行性腹泻的防控工作。
　　（作者联系地址：山东省临沂市沂水县畜牧局 邮编：276400）