水貂伪狂犬病的诊断

王文旭 （辽宁省盖州市动物疫病预防控制中心 115200）

水貂伪狂犬病叫奥者氏奇病。据报道，1813年在美国首次发现本病；1902年匈牙利学者奥者氏奇作了首次报道，称为阿氏病；1931年Shope证明此病与阿氏病为同一传染病；1970年希腊某水貂场因本病死亡393只，死亡率为56.1%。自此以后，世界各地不断发生，我国貂场也有本病存在。本病的病原为疱疹病毒科、疱疹病毒属中的成员，其临床的主要特征为发热、奇氧及脑脊髓炎。

1 流行病学

本病除感染貂外，也感染猪、牛、羊、犬、猫、北极熊、银狐、蓝狐、貉、獾等。哺乳动物和禽类及蛙人工感染也可发病。本病的主要传染源为发病动物，病猪、带毒猪及带毒鼠在传播该病中起重要作用。病猪通过呼吸道分泌物、乳汁、尿液和生殖道分泌物排出病毒，污染饲料和饮水而传播，也可通过直接接触而传染。如水貂采食了病猪和带毒猪，病鼠和带毒鼠的肉而感染发病，此病无明显的季节性，常因饲料中混有病死动物的肉和内脏而引起暴发流行。

2 临床症状

本病的潜伏期为数小时到3天。病貂临床表现为食欲突然减少或不食，体温升高40.5~41.5℃，表现神经症状，如强烈兴奋、冲撞笼壁、转圈运动，发出尖声嘶叫，交替出现精神沉郁，下颌麻痹，舌伸出口外有伤，步态不稳，出现呕吐和腹泻，从口中流出血样液体。病的后期卧地不起，痉挛，昏迷，眼裂缩小或斜向，出现症状后1~24小时死亡。

3 病理学诊断

剖检病死貂可见全身充血和出血，胃内无异常内容物，但其黏膜高度充血和出血，头及肺水肿，扁桃体肿大。组织学变化病毒主要存在唾液腺、结膜、胸髓、心、肺也可能见到。无特征性组织学变化。

4 病原学诊断

采取病貂的脑、扁桃体等，制备悬液，离心，取上清液，（m.mfservicos.com）备用。①细胞培养。采取病料如病貂的脑、扁桃体等制成悬液，离心，取上清液接种于Vero细胞或兔原代肾细胞，在37℃ 1小时后，以维持液加足液量，继续培养，18~24小时后出现病变，如病毒含量低可培养96小时出现病变。将细胞作苏木紫-伊红染色，镜检，可以看到嗜酸性核内包涵体。②动物接种试验。取病死貂的脑及扁桃体，研碎后用Hanks液或磷酸盐缓冲液（PBS）溶液制成10%悬液，离心10分钟，取上清液作为接种材料。人工感染家兔，取上清液1~2毫升，腹侧皮下接种，36~48小时，兔先舔舐接种点，然后用力嘶咬，直到掉毛、破皮、出血，4~6小时后衰竭、倒地、痉挛，呼吸困难，然后死亡。③病毒鉴定。用吸管吸培养物放于铜网上，然后加一滴负染液，再用吸纸接触铜网边缘，将多余液吸去，在室温中干后即可在电镜下检查。可见该病毒，其直径为150~180纳米，有囊膜。本病毒抵抗力较强，8℃条件下存活46天，24℃存活30天。加热60℃，维持30分钟，70℃维持20~30分钟，l00℃很快杀死。

5 血清学诊断

微量血清中和试验（固定病毒稀释血清法）用0.025毫升的稀释棒对稀释液将各种血清连续作2倍稀释，每孔滴下0.025毫升稀释血清。接着每孔加入0.025毫升分离的病毒原液，然后将微量滴定板在室温下放置30分钟，使血清中的抗体与病毒相互作用，每孔再加入0.025毫升Vero细胞悬液（或兔肾原代细胞悬液），加完血清和病毒孔后，多加几个孔作细胞对照（由0.025毫升稀释液和0.025毫升细胞悬液组成）。最后每孔加入0.05毫升矿物油封孔。将平板加盖密封，在35℃温箱中培养。经过48小时培养后进行观察。阳性血清和待检病毒孔因病毒已被中和，各孔长出细胞单层，可判为阳性；如病毒未被中和，已知阳性血清和待检病毒孔细胞退化，产生病变则判为阴性。中和试验的计算公式（中和指数=试验组LD50÷对照组LD50）计算出血清中和价。

免疫荧光试验。采取病貂的脑、扁桃体等病料，切成10毫米×5毫米×3毫米小块，浸于液氮中，取出后立即用冷冻切片机切片，将薄片贴于玻片上，在室温下吹干，用丙酮固定后，用PBS洗3次，每次3分钟。在玻片上的标本上直接滴加用异硫氰荧光素标记的荧光抗体进行染色，使标记的抗体与相应的抗原结合，用PBS洗涤3次，用吸纸吸干，然后用磷酸甘油滴于玻片上，盖上盖玻片，封片，镜检。如在阳性标本的胞浆内出现黄绿色荧光颗粒，阴性标本不出现荧光的条件下，被检样品在荧光显微镜下见到特异免疫荧光，可判为阳性；不出现特异荧光为阴性。