猪呼肠孤病毒感染症的流行与诊断

张 秀 （辽宁省黑山县动物疫病预防控制中心 121400）

1 流行病学

多种动物呼肠孤病毒都可以人工接种感染易感猪，但在自然条件下较少发生种间感染，猪呼肠孤病毒对猪的感染才是主要的。在普通饲养猪群里，3个血清型猪呼肠孤病毒分布特别广泛，有些地区80%猪体内检出3个血清型的病毒抗体。病毒感染的主要途径是消化道和呼吸道，可经胎盘感染。公猪精液中能分离到病毒，但是否可以引起生殖道感染尚未可知。排毒方式主要是通过病猪的粪便、鼻分泌物及精液，尿液未查出病毒。病毒的抵抗力较强，污染的饲料、饮水和猪舍可长时间存活病毒，为猪群的感染创造了条件。猪只感染病毒后较少发病的原因，可能与体内已有免疫状态相关。感染后很快出现抗体转阳，并持续很长时间，甚至维持终生。新生猪被动获得性免疫抗体可存在11星期，继而抗体消失，成为对猪呼肠孤病毒易感猪，成年猪多数抗体阳性。

2 临床症状

据报道，用1型病毒经鼻腔、腹腔、脑内实验感染1~6周龄猪只，病猪出现了轻微的短暂发热而无呼吸和腹泻等其他症状，感染后2星期之内可从呼吸道和消化道分离回收了病毒。剖腹取胎且不吃初乳的仔猪经口感染1型病毒引起仔猪体温升高和腹泻，而接种后生猪没能引发任何症状。在某次试验中看到，剖腹取胎后吃初乳的仔猪和普通饲养仔猪滴鼻或气雾接种1型猪呼肠孤病毒，仔猪发生了温和的呼吸道症状，伴有发热、喷嚏、厌食和倦怠。也有实验报道，挑选血清学阴性母猪在妊娠40~85天时经静脉或肌肉接种病毒，母猪分娩时同一胎中木乃伊、死胎、弱仔和正常仔猪都有。另外实验证明，3型猪呼肠孤病毒鼻腔接种无特定病原体（SPF）的育成猪，出现轻微呼吸症状。3型病毒静脉或肌肉接种妊娠36~60天的孕母猪从胚胎中分离到病毒。妊娠期50~70天时接种，能从胚胎和胎盘分离到病毒。在妊娠70天以后接种，只能从胎盘分离到病毒。

3 病理学诊断

猪实验接种本病毒极少显示肉眼病变，只有轻微的显微病理损害（m.mfservicos.com）。虽然静脉或肌肉接种妊娠40~85天母猪出现产木乃伊、弱仔、死产现象，但没有特征性肉眼变化或组织病理学损害。用肠源呼肠孤病毒经口接种1周龄剖腹取胎的不吃初乳仔猪，导致空肠和回肠的局部绒毛萎缩。用猪1型呼肠孤病毒气雾接种4周龄SPF猪，未见肉眼病变，但产生肺部显微组织学损害，包括肺泡和肺泡隔中存在多灶性淋巴细胞和巨噬细胞积聚，及细支气管周围形成轻微的结节性增生。用3型呼肠孤病毒鼻腔内接种70千克重的SPF猪，导致小叶性肺萎陷、肺气肿和细支气管周围结节性淋巴细胞增生。要明确猪呼肠孤病毒引起的病理学变化特点尚需要作进一步的观察。

对病猪群流行病学，临床症状和病理变化进行综合分析可以得出初步印象诊断。进一步可以做实验室检验，其中病毒分离等病原学检查较重要。

4 病原学诊断

样品采集和处理。粪便或分泌物制成1∶10悬液冻融2次，3 000转/分钟离心30分钟，上清液用0.22微米微孔滤膜滤过供接种用。

病毒分离。一般应用细胞培养分离技术。最常用的细胞是MA104细胞系，其他很多种细胞系以及多种原代细胞都能适应，但初次分离时MA104细胞系效果较好。细胞浓度为2×105个/毫升，培养液为10%牛血清MEM，接种1毫升的MA104细胞于细胞培养管内，长成单层后供试验接种用。

接种。待细胞长成单层后，吸出培养液，充分洗涤3次。每份样品接种2~4管，每管接种样品0.1毫升，感作1小时，Hank´s液洗2次，加维持液1毫升，置37℃内静止培养。每隔3天用光学显微镜观察1次，至第12天时，从每管取上层液0.1毫升移种于新培养管内。原培养管及新培养管均不更换维持液，即使细胞老化，也要坚持培养至第21天。

结果分析。本病毒MA104细胞培养可出现特征性细胞病变（CPE），细胞内颗粒增多，不易从玻璃壁脱落，这一点很容易与猪肠道病毒等相区别。细胞层常以条形突出物贴于管壁上，当在显微镜下观察而摇动培养管时，培养物飘浮于培养液中。典型的细胞病变可轻易辨认出来，如有疑问，可进行传代培养。样品分离病毒时，设阳性对照，将标准参考毒株培养于MA104细胞，观察细胞病变，被检样品CPE与标准参考毒株CPE一样，则可确认由被检样品分离到了猪呼肠孤病毒。