公牛精液品质的检验和评价

雪雅妮

（青海省海西州动物疫病预防控制中心，青海海西817099）

作者简介：雪雅妮（1985 -），女，青海德令哈人，大专，助理畜牧师，研究方向为品种选育，畜禽品种改良技术，动物纤维物理性能的分析工作。

1 精子初级活动性检验

精液量常用量筒测量。采精后尽快将一小滴精液滴在温热的载片上（35～37℃温热显微镜台），100倍下镜检，O～5级记分。O表示完全停止活动，5表示活动很好。公牛精子初级活动性的评分标准是波动性移动，代表精子浓度、活动精子比例及其活动性。如果正确使用该方法，其结果与公牛生育力有很大的相关性。任何公牛如果连续出现精子评分在2以下则为可疑。

2 精子直线活动性检验

精子直线活动性检验即精子直接向前运动的百分比。最好把精液稀释后检验（大约1: 50，视浓度而定），稀释液为预热的37℃生理盐水，在温热的载片上加盖片400倍下镜检。大于50%的比例是很好的，高百分比直线活动性一般意味着精子的快速直线运动。400倍下镜检也可以做一些初步的精子形态学和精液中特殊细胞的观察。

3 精子形态学观察

一般家畜精子长50～70Um，尾部约占全长的80%。荷斯坦牛的精子头部长约9.5um、中段长约14. lum，主段长约47. 5um，终段长2～3um。精子形态学与睾丸的功能密切相关。精子的头部、中部和尾部形态均需要观察。全面的形态学检验包括1000倍下的精子及其他细胞的观察，记录任何异常形态及100个精子中异常精子的个数。尽管在牧场400倍下的初步观察可以帮助做出预后以及判断涂片是否做好，但详细的观察应在远离牧场的实验室进行。建议至少使用两种不同的染色法，一种是稀释精液的涂片，一种是直接涂片，固定后染色，具体方法如下。①苯胺黑一伊红染色。采集的新鲜精液需与预热的染液在小试管中混合，以大约1: 10的比例，35～37℃放置1min，然后取一小滴在预热的载片上涂一薄层（就像做血涂片一样），在温热培养箱或显微镜台干燥，如此时冷却会对精子的形态产生影响。涂片染色也可以观察活、死精子比率，因为伊红是一种活体染色剂，把死精子（不活动的精子）染成粉红色，而活精子不着色成苍白或白色。活精子百分比和直线运动精子百分比与生育力都密切相关。②姬姆萨染色及亚甲蓝染色。至少制备3张精液直接涂片（方法同前），自然干燥，这些可以在牧场完成。回到实验室后，涂片分别用10%缓冲盐溶液和甲醇微热固定，前2张涂片用10%姬姆萨缓冲液染色约3h后水洗，一般用自来水。这种染色法突出顶体，尤其可以鉴别顶体部分的异常。用两种不同的固定法对形态学检验有独特的价值。热固定涂片用于亚甲蓝染色。比较精液直接涂片和精液染色液混合涂片也可查明由于稀释精液操作不当对精子形态学的影响。总体上，至少需要70%的正常精子，但是影响精液生育力的活精子的具体比例与异常精子的类型及程度有关。

4 其他细胞检验

正常情况下，精液中有许多其他细胞，在直接涂片姬姆萨染色及（或）直接涂片亚甲蓝染色进行观察。大多数细胞来自于包皮或尿道上皮，这些细胞对精子没有多大影响。可是如出现大量白细胞、退化的精子细胞、多核巨细胞及所谓的“圆细胞”可能提示精子发生障碍。

5 精液浓度检验

精子外观为浓奶油状，密度约3×l09／mL；奶油状，精子密度约2×l09／mL；精子外观为牛奶状，密度约(0.5～1)×10^9／mL;精子外观为水状，密度约0.25×l0^9／mL。准确的测算需用标准浊度仪或白细胞计数仪。

6 全面判定

有证据表明，通过假阴道采精和人工授精操作，精子活动性和死精子百分比与生育力有关。在北美，动物遗传育种稳定性评价系统的新学派根据电子射精器采精进行检验，其方法可能不适合假阴道采精样品。该学派建议，好的精液样品的“总活动性”至少应为“中”，“个体直线运动性”至少为30%，形态学观察正常精子至少为70%。这里的“总活动性”与初级活动性相同，“个体直线运动性”与直线运动性相同。一般认为，初级运动性、直线运动性、死精子百分比、正常形态精子百分比与公牛生育力相关性最好。公牛鲜精评价最小参考值及范围：单次采集精液量为4(2～12) mL，外观为白色或淡黄色，密度为1．O (0.3～2.5)×l09／mL，初级运动性(O～5)≥2，直线运动性>50%，总死精子数<50%，总形态异常精子<30%。