大豆水溶性蛋白检测研究

陈义飞1，徐佳璐2

（1．黑龙江省大庆市粮食质量检验监测站，黑龙江大庆163001;2．哈尔滨国家粮食质量监测中心，黑龙江哈尔滨150060）

文献标识码：A

文章编号：2095-9737(2016)07-0070-01

作者简介：陈义飞（1972　-），男，黑龙江大庆人，大专，工程师，主要从事粮食质量检验监测方面工作。

1　仪器与材料

主要仪器设备：KDY　-　9820凯氏定氮仪；perten3100锤式旋风磨、JA　-　203N千分之一电子天平；可调速离心机、HY4调速多用振荡器等。样品与试剂：选取黑龙江地产大豆，除去杂质作为样品。试剂有20g/L硼酸溶液；40g／L氢氧化钠溶液；0.　1Omol／L盐酸；浓硫酸（分析纯）。

2　实验方法

将除杂后的大豆样品用锤式旋风磨进行粉碎后通过60目筛，通过率90%以上。每次实验用千分天平准确称取5g样品，加入一定量蒸馏水进行溶解，在一定温度条件下震荡提取一段时间，萃取完成后将溶液转移至容量瓶中并定容至250mL，用凯氏定氮仪测定其蛋白质含量即为样品的水溶性蛋白含量，分别记录消耗滴定液的体积，计算检验结果。

提取温度对水溶性蛋白测定结果的影响实验。用分析天平分别准确称取5.　OOOg样品5份，编号为A1～A5。分别置于250mL具塞磨口三角瓶中，分别向其中加入蒸馏水各200mL，充分摇匀充分分散后，分别将其置于温度设定为20℃（室温）、30℃、40℃、50℃、60℃的恒温水浴锅中，分别进行提取2h。提取完成后经过离心，转移至容量瓶中定容，最后进行消化并测定其蛋白含量。

提取时间对水溶性蛋白测定结果的影响实验。用分析天平分别准确称取5．OOOg样品5份，编号为Bl～B5。分别置于250mL具塞磨口三角瓶中，分别向其中加入蒸馏水各200mL，充分摇匀（注意勿使样品过多的粘于瓶壁上）充分分散后，将其置于温度设定为40℃的恒温水浴锅中，分别进行提取30　min、60min、90min、120min和180　min。提取完成后分别经过离心，转移至容量瓶中定容，最后进行消化并测定其蛋白含量。分别记录消耗滴定液的体积，计算检验结果。

提取次数对水溶性蛋白测定结果的影响实验。用分析天平分别准确称取5．OOOg样品5份，编号为C1～C5。分别置于250mL具塞磨口三角瓶中。对Cl进行一次提取，向Cl中加入蒸馏水200mL，充分摇匀后，将其置于温度设定为40℃的恒温水浴锅中进行提取2h。对C2进行2次提取，向C2中加入蒸馏水lOOmL，充分摇匀后，将其置于温度设定为40℃的恒温水浴锅中进行提取th之后，离心转移出溶液，向剩余样品中继续加入蒸馏水100mL，重复上述操作。用同样的方法分别对C3～C5进行3～5次的提取，提取用蒸馏水的总量均为200mL，总提取时间均为2h，每次提取后都进行离心。将5份样品都提取完毕后，定容、消化并测定其蛋白含量。分别记录消耗滴定液的体积，计算检验结果[养殖网:www.nczfJ.com/]。

3　结果与分析

提取温度对水溶性蛋白测定结果的影响：通过计算得到各样品测得值如下：A1水溶性蛋白含量为28.　9%，A2水溶性蛋白含量为31.2%，A3水溶性蛋白含量为32.　6%，A4水溶性蛋白含量为32.　5%，A5水溶性蛋白含量为32.　3%。从检测数据可以看出提取温度为20℃、30℃、40℃时，水溶性蛋白含量随温度上升而呈上升趋势，在提取温度为40℃、50℃、60℃时，无明显变化。即水溶性蛋白含量在40℃时达到高峰，温度的提高已经不能提升水溶性蛋白的萃取效果。

提取次数对水溶性蛋白测定结果的影响：通过计算得到各样品测得值如下：B1水溶性蛋白含量为26.　7%，B2水溶性蛋白含量为28.　5%，B3水溶性蛋白含量为31.　8%，B4水溶性蛋白含量为32.　7%，B5水溶性蛋白含量为32.　5%。从检测数据可以看出提取时间为30min、60min、90min时，水溶性蛋白含量随提取时间的延长而呈上升趋势，在提取时间为90　min、120　min和180min时，无明显变化。也就是说，水溶性蛋白含量在提取时间达到90min时达到高峰，提取时间延长已经不能提升水溶性蛋白的萃取效果。

提取时间对水溶性蛋白测定结果的影响：通过计算得到各样品测得值如下：Cl水溶性蛋白含量为32.　4%，C2水溶性蛋白含量为33.　2%，C3水溶性蛋白含量为33.　5%，C4水溶性蛋白含量为33.　8%，C5水溶性蛋白含量为33.7%。从检测数据可以看出，使用相同水量，相同提取时间，不同提取次数时，提取次数为1次、2次、3次、4次时，水溶性蛋白含量随提取次数的增加而呈上升趋势，且上升的幅度不断减小，在提取次数增加到5次时，无明显变化。也就是说，水溶性蛋白含量在提取4次时达到高峰，提取次数增加已经不能提升水溶性蛋白的萃取效果。

4　结论

通过对实验数据的分析可知，对大豆水溶性蛋白的提取过程中，温度、时间以及提取次数对提取结果均有不同程度的影响。其中，提取的最佳温度为40℃，再提高温度对提取的帮助不大；提取的时间以90　min为宜；提取次数以两次为宜，增加次数提取效果提升微弱，还可能因为多次离心转移操作不当反而降低提取效果。因此，水溶性蛋白的最佳提取条件为：将样品分两次提取之后于40℃下恒温提取90min。